Ⅱ級生物安全柜在出廠前就已經完成了物理檢測驗證<包括噪聲、照度、向內風速、下送風速、氣流流型等)，生物安全柜在實驗室安裝后，主要是生物學檢測，它包括人員保護、樣品保護、交叉污染保護和出風口泄漏檢測驗證。其中人員保護、樣品保護、交叉污染保護的生物學檢測可以參照美GG家標準NSF49《Ⅱ級(層流)生物安全柜》或者參照G家食品藥品管理局的《生物安全柜》(YY0569―2005)或者是《生物安全柜應用指南――原理、使用和驗證》。

(一)人員保護檢測驗證

合格判定標準：從6個AGI-30采樣器采集到粘質沙雷氏菌或枯草芽孢桿菌的CFU數量，在每次檢測時不得超過10個。采樣時間達30min時，裂隙式空氣采樣器的平板計數不得超過5個菌落。必須重復3次試驗。對照平板必須是陽性結果。當平板含有300個以上的粘質沙雷氏菌或枯草芽孢桿菌菌落時，即為陽性。

(二)試驗樣品保護檢測驗證

合格判定標準：每次試驗中，在瓊脂平板上粘質沙雷氏菌或枯草芽孢桿菌的菌落數不得超過5個。必須重復3次試驗。對照平板必須是陽性結果。當平板含有300個以上的粘質沙雷菌或枯草芽孢桿菌菌落時，即為陽性。

(三)交叉污染檢測驗證

合格判定標準：從攻擊側壁到距離側壁36cm之間的一些瓊脂平板可以得到粘質沙雷氏菌或枯草芽孢桿菌菌落，它們用作陽性對照。每次測試時，在大于38cm中心處的瓊脂平板所得到的菌落總數不得超過2個。在安全柜的左側和右側各做3次重復實驗。

(四)出風口泄漏檢測驗證

出風口泄漏檢測是在美G標準NSF49、歐洲標準ENl2469中沒有列出的檢測驗證項目。但是，在對進口的Ⅱ級生物安全柜和G產的Ⅱ級生物安全柜出風口泄漏檢測中，發現確實存在泄漏的情況，且G產的泄漏率比進口的要高。導致出風口泄漏的主要原因有兩個：一是HEPA濾器與固定框之間密封不嚴，二是HEPA濾器在安裝過程中有損傷。對出風口的生物檢測驗證可以及時發現泄漏。

出風口泄漏檢測具體操作方法可以《生物安全柜應用指南――原理、使用和驗證》的人員保護測試驗證中的氣溶膠發生，采樣用Andersen 2級采樣器在出風口處采樣30min。合格判定標準：每次試驗中，在瓊脂平板上粘質沙雷氏菌或枯草芽孢桿菌的菌落數不得超過5個。必須重復3次試驗。